使用徠卡 DM750 P 偏光顯微鏡觀察西藥結(jié)晶晶體顆粒，需結(jié)合其光學(xué)特性與藥物晶體的雙折射現(xiàn)象，以下為具體操作指南及分析要點：

一、徠卡 DM750 P 的適配性優(yōu)勢

無應(yīng)力光學(xué)系統(tǒng)：

DM750 P 采用偏振等級 5 的無應(yīng)力物鏡（如 63 倍物鏡），避免光學(xué)部件自身雙折射干擾，確保藥物晶體的真實雙折射信號（如磺胺類、阿司匹林晶體的典型干涉色）。

寬范圍物鏡組合：

2.5 倍概覽物鏡：快速定位晶體分布（如片劑崩解后的顆粒聚集區(qū)）；

10-40 倍物鏡：觀察晶體形態(tài)（針狀、片狀、棱柱狀）及團(tuán)聚狀態(tài)；

63 倍油鏡：解析晶體邊緣細(xì)節(jié)（如晶面夾角、解理紋）。

智能偏光控制：

內(nèi)置可旋轉(zhuǎn)起偏器（0-360°）和固定檢偏器（正交 / 平行模式），支持一鍵切換明場 / 偏光模式，適合西藥顆粒的動態(tài)觀察（如溶劑揮發(fā)過程中晶體生長）。

二、樣品制備與觀察流程

1. 樣品預(yù)處理

混懸液法：將西藥顆粒（如原料藥粉末）分散于液體石蠟或甘油中，避免靜電團(tuán)聚，厚度≤50μm（防止光程過長導(dǎo)致干涉色飽和）。

薄片法：針對片劑或膠囊內(nèi)容物，用刀片刮取少量樣品，夾于載玻片 - 蓋玻片之間，輕壓成單層顆粒（適合晶型一致性分析）。

注意：避免高溫制片（如熔融結(jié)晶），防止晶型轉(zhuǎn)變（如布洛芬的 α/β 晶型差異）。

2. 顯微鏡參數(shù)設(shè)置

光路校準(zhǔn)：

開啟內(nèi)置 LED 光源（產(chǎn)熱低，避免晶體熱損傷），調(diào)節(jié)亮度至 10-20%（保護(hù)人眼同時減少光漂白）；

旋轉(zhuǎn)起偏器至 0°，檢偏器至 90°（正交偏光），觀察空白載玻片應(yīng)呈全暗（驗證偏光正交性）。

載物臺校準(zhǔn)：

確保旋轉(zhuǎn)載物臺中心與物鏡光軸重合（通過十字刻度校準(zhǔn)，誤差＜5μm），避免晶體旋轉(zhuǎn)時偏離視野（適合晶軸定向分析）。

3. 觀察與記錄

正交偏光下的典型現(xiàn)象：

消光現(xiàn)象：旋轉(zhuǎn)載物臺（0-360°），晶體每轉(zhuǎn) 90° 出現(xiàn)一次消光（各向異性晶體特征，如對乙酰氨基酚的單斜晶系）；

干涉色：根據(jù)晶體厚度和雙折射率，呈現(xiàn)彩虹色（如磺胺嘧啶銀的一級灰至二級藍(lán)），結(jié)合石膏試板（λ=550nm）定量雙折射值；

晶體形態(tài)：記錄顆粒長寬比（如阿莫西林的針狀晶體長徑比＞5:1）、邊緣規(guī)整性（區(qū)分單晶與多晶聚集體）。

動態(tài)觀察：

開啟延時攝影（如每 5 分鐘拍攝一次），監(jiān)測溶劑揮發(fā)過程中晶體的析出順序（如鹽酸氨溴索從無定形到晶體的轉(zhuǎn)變）。

三、西藥晶體分析關(guān)鍵指標(biāo)

晶型鑒別：

單折射晶體（如氯化鈉）：全消光，無干涉色；

雙折射晶體（如布洛芬）：旋轉(zhuǎn)載物臺出現(xiàn)四次消光，干涉色隨厚度變化；

混晶判斷：視野中同時存在多種干涉色或消光行為（如卡馬西平的 Form I/III 混晶）。

顆粒表征：

尺寸分布：通過徠卡 LAS X 軟件測量等效圓直徑（如 API 顆粒 D50 應(yīng)＜20μm 以保證溶出度）；

表面紋理：觀察解理裂紋（如乙酰水楊酸的劈裂面）、臺階狀生長紋（提示結(jié)晶動力學(xué)）。

純度評估：

雜質(zhì)晶體（如中間體殘留）常表現(xiàn)為異常干涉色或消光行為（如撲爾敏中混有馬來酸雜質(zhì)時，出現(xiàn)局部強(qiáng)雙折射）。

四、注意事項與進(jìn)階技巧

光程補(bǔ)償：

對于厚晶體（＞100μm），使用 λ/4 波片補(bǔ)償光程，避免高階干涉色重疊（如頭孢呋辛酯的柱狀晶體）。

環(huán)境控制：

開啟顯微鏡內(nèi)置溫臺（37℃±0.1℃），模擬體內(nèi)溶出環(huán)境，觀察溫度敏感型晶體的相變（如茶堿的水合物脫水過程）。

聯(lián)用技術(shù)：

偏光結(jié)果結(jié)合 XRD（確認(rèn)晶型）、DSC（熱穩(wěn)定性），例如：通過偏光發(fā)現(xiàn)某批次硝苯地平晶體出現(xiàn)異常消光，進(jìn)一步 XRD 證實為亞穩(wěn)態(tài) Form B。

五、典型案例：阿司匹林晶體觀察

樣品：阿司匹林原料藥粉末（乙醇重結(jié)晶）；

觀察：正交偏光下呈菱形片狀，旋轉(zhuǎn)載物臺至 45° 時出現(xiàn)二級黃干涉色，消光角與晶面夾角吻合（證實單斜晶系）；

分析：邊緣光滑無裂紋，提示結(jié)晶工藝穩(wěn)定；無雜色顆粒，純度＞99.5%（符合藥典標(biāo)準(zhǔn)）。

通過徠卡 DM750 P 的高分辨率偏光成像與智能分析，可快速實現(xiàn)西藥晶體的晶型鑒別、顆粒表征及工藝優(yōu)化，尤其適用于原料藥質(zhì)控、仿制藥一致性評價及結(jié)晶工藝開發(fā)。